基质胶凝胶制备方法及相关FAQ

2023-08-15 16:53:27     来源 : 个人图书馆-艾美捷科技

类器官(organoids)是指一种利用干细胞、祖细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。2021年,类器官技术被列为“十四五”国家重点研发专项[1],作为疾病模型,相比于传统2D疾病模型,类器官在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近,在多领域将发挥重要,诸如细胞治疗、药物研发、基因工程、免疫研究、组织再生等领域。基质胶作为类器官和3D培养的重要载体,在其中发挥着举足轻重的作用。

基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取取的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包如TGF-β、EGF、IGF、FGF等多种生长因子。在室温条件下,基质胶聚合形成具有生物学活性的三维基质,能模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化。


(相关资料图)

凝胶制备方法

1)基质胶融化后,用预冷的枪头混匀基质胶。

2)将需要使用的培养板置于冰上,然后将培养的细胞与基质胶混合,用遇冷的枪头使细胞悬浮均匀。按照150-200μL/cm2生长面积的浓度加入基质胶制备3D培养使用的凝胶,详见表1。

3)在37℃放置30min,此时即可加入细胞培养液。

3D细胞及类器官培养过程:

Biogradetech低生长因子,基质胶(类器官,3D培养)详情:

中文名称:低生长因子,基质胶(类器官,3D培养)

英文名字:Basement Membrane Matrix, Growth Factor Reduced (For Organoid/3D cell culturing)

货号:A-MGL01-10mL

规格:10mL

形式:标准型基质胶4℃溶解后,呈透明流动液态状态;高浓度基质胶0℃溶解后,呈透明流动液态状态,4℃久置呈半凝胶状

保存建议:≤-20°C

基质胶FAQ:

1、拿到的基质有色差的变化(淡黄色到深红色)是什么原因?

对于含酚红的基质胶主要原因是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶使基质胶分散均匀。

2、基质胶的操作要注意哪些事项?

所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的器材以保证基质胶正常操作。

3、基质胶的如何分装冻存使用?

可将冻融后的基质胶分装在多个冻存管,冻存管需预冷,分装后迅速冷冻并保存,避免多次冻融。

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